A comparative analysis of the suitability of different peripheral blood samples for reverse transcriptase polymerase chain reaction / Análise comparativa da adequação de diferentes amostras de sangue periférico em ensaios de reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa

Venipuncture is one of the easiest clinical procedures to obtain viable blood samples to evaluate gene expression using mRNA analysis. However, the use of this sample type in reverse transcriptase polymerase chain reaction tests (RT-PCR) without prior treatment is controversial. We therefore propose to compare the suitability of different peripheral blood samples (whole blood without treatment, whole blood with hemolysis, peripheral blood mononuclear cells and frozen whole blood) for RT-PCR analysis. The results showed that, despite the blood sample being peripheral, it is possible to extract a fair amount of RNA and perform target gene amplification. Thus, peripheral blood without prior treatment could be used to investigate the gene expression using Real Time PCR.

A punção venosa representa um dos procedimentos clínicos mais simples na obtenção de amostras de sangue periférico e avaliação da expressão gênica através da análise do RNA mensageiro. Contudo, a utilização desta amostra, sem um tratamento prévio, em ensaios de Transcrição Reversa (RT-PCR) é controverso. Desta forma, propomos comparar a adequação de diferentes amostras de sangue periférico (sangue total sem tratamento, sangue total após hemólise, células mononucleares do sangue periférico e sangue total congelado) em ensaios de Transcrição Reversa Os resultados mostraram que independente da amostra de sangue periférico é possível extrair RNA em quantidade adequada e realizar a amplificação do gene alvo. Desta forma, o sangue periférico sem tratamento prévio pode ser utilizado em abordagens que envolvam a avaliação da expressão gênica por reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real.

Biología molecular y mocrometástasis del melanoma cutáneo / Molecular biology and micrometastasis in cutaneous melanoma

Las controversias en el manejo de la enfermedad ganglionar ha permanecido en discusión desde hace 20 años. Los recientes avances tecnológicos en biología molecular y las nuevas técnicas quirúrgicas mediante la detección del ganglio centinela han permitido identificar con mayor precisión un grupo seleccionado de pacientes que se habrán de beneficiar en el control local de la enfermedad y en la supervivencia, al efectuarse disecciones ganglionares de manera electiva ante la presencia de metástasis ganglionar microscópica y con la administración de terapias sistémicas ante la detección temprana de micrometástasis a distancia. Mediante el empleo de los marcadores de membrana de las células con melanoma, el uso de anticuerpos monoclonales nos permiten identificar el fenotipo de las lesiones melanocíticas, que pueden ser empleadas en inmunohistopatología e inmunocentellografía. Finalmente, el advenimiento de las técnicas de transcriptasa reversa, aunado a las de la reacción en cadena de polimerasa, ha permitido una mayor sensibilidad en la detección de la enfermedad micrometastásica, modificándose de manera significativa y haciendo má precisa la estadificación de los pacientes con melanoma. El empleo de estas técnicas es factible en nuestro medio por su costo y sencillez. Con base en ellas es posible diagnosticar micrometástasis en aproximadamente el 33 por ciento de pacientes clasificados en estadio I (lesiones < 0.76 mm), en quienes no se identificarían metástasis ganlgionares mediante técnicas de hematoxilina eosina. El 50 por ciento de estos enfermos podrían recibir una terapia locorregional más agresiva con el consecuente beneficio en la supervivencia. Sin embargo, en la actualidad, estas técnicas únicamente son empleadas de manera rutinaria en estudios protocolizados